Изучение противовирусных свойств новой лекарственной формы препарата Панавир в условиях экспериментальной герпесвирусной инфекции у мышей

ГУ НИИ вирусологии им.Д.И.Ивановского РАМН, ГУ Институт физико-химической медицины МР
Кущ А.А., Климова Р.Р., Козлов А.Ю., Галегов Г.А., Стовбун С.В., Литвин А.А., Сергиенко В.И.
Калинина Т.С.

Герпесвирусная инфекция – одна из самых распространенных, пожизненных вирусных инфекций человека (1, 2, 3). По данным ВОЗ, около 90% населения земного шара имеют антитела к вирусу простого герпеса (ВПГ) и примерно у 10% - 20% из них наблюдаются различные клинические проявления герпетической инфекции (4). Рецидивирующее течение герпеса, в частности генитальных форм заболевания, наблюдается у 50-75% инфицированных больных.

Современная терапия инфекций, вызванных ВПГ, основывается на комплексном использовании препаратов прямого противовирусного действия и препаратов непрямого действия, повышающих неспецифическую резистентность организма. Противовирусные препараты из ряда ациклических нуклеозидов (ацикловир, ганцикловир, фоскарнет, цидофовир и фомивирсен), прямо или опосредованно ингибирующие вирусную ДНК-полимеразу ВПГ и снижающие вирусную продукцию у пациентов с клиническими симптомами инфекции, составляют в настоящее время основную группу антигерпетических лекарственных средств прямого антивирусного действия (5, 6, 7). Однако узкий спектр их действия, развитие побочных эффектов при длительном назначении этих препаратов и формирование вирусной резистентности как результата неполного подавления репликации ВПГ в организме во время длительной антивирусной терапии составляют недостатки этой группы препаратов (8,9,10).

В рамках иммунокорригирующей терапии больным хронической герпетической инфекцией в настоящее время наиболее широко применяются препараты интерферонов и их индукторы (11, 12). Несмотря на неоспоримое положительное влияние интерферонотерапии при вирусных заболеваниях имеется ряд негативных моментов в данном виде лечения. Так, экзогенное введение какого-либо вещества, вырабатываемого в организме, вызывает по механизму обратной связи угнетение его выработки в последствии. В ряде случаев применение препаратов и индукторов интерферона могут являться фактором риска развития аутоиммунных заболеваний (13). Таким образом, лечение герпесвирусной инфекции, особенно тех ее форм, которые характеризуются вялым, рецидивирующим течением, устойчивостью к этиотропной терапии, остается сложной задачей.

Вышеизложенное обусловливает актуальность поиска новых эффективных антигерпетических лекарственных средств, оптимально сочетающих в спектре фармакологической активности свойство этиотропно подавлять развитие ВПГ и способность стимулировать неспецифическую резистентность организма.

В настоящее время ведется поиск новых анти-ВПГ агентов среди широкого спектра веществ, различающихся по химическому строению и физическим свойствам. Получены данные о противовирусных свойствах новых нуклеозидных и нуклеотидных производных, дизамещенных производных 5,6- дихлорбензимидазола, ацилоксиамидинов и их производных и ряда других соединений [ 7, 14, 15, 16 ] . Как метод рационального расширения арсенала лекарственных средств противогерпетического действия можно рассматривать создание препаратов на основе растительного сырья.

В ряду существующих противовирусных средств отечественный противовирусный препарат растительного происхождения Панавир выделяется сочетанием высокой антигерпетической активности и большой терапевтической широтой (17). Активной субстанцией препарата является выделенный из столонов растения Solanum tuberosum полисахарид, относящийся к классу гексозных гликозидов. В медицинской практике Панавир рекомендован для лечения герпесвирусных инфекций, в том числе генитального рецидивирующего герпеса, и клещевого энцефалита в ампулированной лекарственной форме в виде 0,004% раствора для внутривенных инфузий. (18, 19). На основе активной субстанции препарата разработана новая лекарственная форма – суппозитории ректальные.

Целью настоящего исследования явилось изучение противовирусной активности новой лекарственной формы препарата Панавир– супозитории ректальные в сравнении с его ампулированной лекарственной формой.

Материалы и методы.

Исследование ректальной лекарственной формы Панавира.

Животные. Опыты проводили на мышах инбредной линии DBA массой тела 18- 22 г , полученных из Центрального питомника лабораторных животных "Крюково" РАМН.

Вирус и клетки. Вирус простого герпеса 1 типа (ВПГ1), референс-штамм F , поддерживали путем пассирования на культуре клеток Vero , выращиваемых на среде Игла (ПАНЕЭКО, Россия), содержащей 10% сыворотки эмбрионов коровы (ПАНЭКО, Россия), 2мМ глутамина, 50 мкг/мл гентамицина в атмосфере 5% СО 2 .

Для ректального введения суппозитории расплавляли на водяной бане при температуре 40 ° С. После 24-часовой пищевой депривации животным при использовании специальной насадки вводили препарат ректально в объеме 0,2 мл (35,7 мкг активной субстанции) двукратно – через 24 и 72 часа после вирусного заражения. Защитное действие препарата изучали, используя по 20 мышей в каждой группе. Первую группу заражали внутрибрюшинно 25 ЛД 50 /мл ВПГ 1. Вторую группу животных заражали той же летальной дозой ВПГ1 и вводили суппозитории ректальные, содержащие Панавир , через 24 и 72 часа после заражения. Третью группу мышей заражали 2,5 ЛД 50 ВПГ1. Четвертую группу инфицировали 2,5 ЛД 50 ВПГ1 и Панавир вводили по схеме, указанной ранее. Пятая группа мышей – контроль, незараженные мыши, получавшие суппозитории-плацебо без содержания субстанции Панавир . Животных наблюдали в течение 29 дней.

Исследование ампулированной формы Панавира.

Животные. Опыты проводили на беспородных белых мышах массой тела 8- 10 г , (питомник “Светлые горы”), содержащихся в стандартных условиях при 12-часовом цикле смены света и темноты.

Вирус и клетки. Вирус простого герпеса 1 типа (ВПГ1) поддерживали путем пассирования на культуре клеток Vero , выращиваемых на среде двойной Игла, содержащей 8% эмбриональной телячьей сыворотки. Инфицирующая доза ВПГ1 составила 10 ЛД 50 в 0,2 мл внутрибрюшинно.

Ампулированую форму Панавира (0,004% раствор) вводили внутривенно в объеме 0,4 мл через 24 ч и 96 ч после заражения животных ВПГ1. Зараженным животным контрольной группы, не получавшим Панавир, вводился физиологический раствор в эквивалентном объеме. В каждой группе было по 20 животных.

Статистическая обработка. Статистическую значимость различий между экспериментальными и контрольными группами определяли по методу оценки для выборочных долей вариант (20).

Результаты и их обсуждение.

В результате проведенных экспериментов было показано, что в первой группе мышей в течение 12 дней после заражения погибли 14 из 20 (70%) животных. Во второй группе в течение 17 дней после заражения погибло 7 из 20 (35%) животных. В третьей и четвертой группе в течение 9-16 дней после заражения погибло 9 из 20 (55%) животных. В контрольной группе все животные остались живы

На рисунке 1 представлены данные по выживаемости мышей при использовании ректальной и ампулированной форм препарата для лечения экспериментальной герпесвирусной инфекции. При исследовании противовирусной активности ректальной формы Панавира установлено, что степень защитного эффекта Панавира зависит от инфицирующей дозы ВПГ1. Так, при заражении мышей вирусом в дозе 25ЛД 50 защитный эффект препарата в отношении гибели животных составил 35% ( P £ 0,05 по сравнению с зараженным контролем). При уменьшении инфицирующей дозы до 2,5ЛД 50 доля выживших животных возросла на 25% по сравнению с группой мышей, получивших ВПГ1 в дозе 25 ЛД 50. Однако защиты животных от гибели в данном случае не наблюдали. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют не только о способности Панавира в новой лекарственной форме защищать от гибели мышей в условиях достаточно жесткой экспериментальной модели герпесвирусной инфекции, вызывающей гибель животных, но и выявляют некую закономерность в соответствии с которой эффективность препарата прямо пропорционально зависит от глубины инфекционного процесса.

Двукратное внутривенное применение Панавира увеличивает долю выживших в условиях экспериментальной ВПГ1 инфекции животных на 30%, что достоверно отличается от аналогичного параметра в группе зараженных, но не леченных, животных. Гибель мышей контрольной группы регистрировали в период с 8 по 13 день после заражения, животные экспериментальной группы погибали в период с 9 по 15 день.

Введение Панавира в ампулированной лекарственной форме увеличивает выживаемость зараженных ВПГ-1 мышей на 30%, при аналогичном применении ректальной – на 35% по сравнению с соответствующими контрольными группами зараженных и не получивших лечение животных. В обеих экспериментальных ситуациях препарат применялся двукратно – через 24 и 72-96 ч после инфекции. Панавир при внутривенном способе вводился в объеме 0,4 мл на животное. Указанный объем лекарственного препарата содержит 16 мкг субстанции Панавира, что составило (с учетом весового диапазона животных) дозу 1600-2000 мкг/кг. При ректальном применении каждому животному вводили 35,7 мкг Панавира, что составило дозу 1622-1983 мкг/кг в зависимости от веса мыши (Табл.1). Таким образом, сравнительный анализ антигерпетической активности ампулированной и ректальной лекарственных форм Панавира свидетельствует об их сопоставимой эффективности в условиях экспериментальной ВПГ1-инфекции на мышах, несмотря на некоторые методические различия, касающиеся породы, возраста лабораторных животных и инфицирующей дозы ВПГ1 (Табл.1). Эти результаты являются основанием для предположения сопоставимой клинической эффективности ампулированной и ректальной лекарственных форм препарата Панавир в при лечении герпес-вирусных инфекций.

Рисунок 1. Защитный эффект Панавира в условиях экспериментальной герпесвирусной инфекции у мышей. По горизонтали представлены группы животных:

1 - заражение ВПГ1 в дозе 25 ЛД 50, инбредные мыши DBA , Панавир суппозитории ректальные;
2 - заражение ВПГ1 в дозе 2,5 ЛД 50, инбредные мыши DBA , Панавир суппозитории ректальные;
3 - заражение ВПГ1 в дозе 10 ЛД 50, атбредные мыши альбиносы, ампульная форма Панавира.

Заполненные столбики – животные, зараженные ВПГ1 и не получавшие Панавира,
заштрихованные – зараженные ВПГ1 мыши, пролеченные Панавиром,
пустые – контрольные животные, получавшие плацебо.

Таблица 1. Противовирусная ээфективность ампулированной и ректальной лекарственных форм Панавира в условиях экспериментальной герпес-вирусной инфекции на мышах.

Отзывы о Панавир, вопросы, комментарии врача